لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (pdf) مراجعه فرمایید.

زمینه و هدف: با توجه به حساسیت کم آزمایش مستقیم با مرکب چین و کشت برای تشخیص مننژیت کریپتوکوکی به کار بردن تکنیک های حساس لازم می باشد. در این مطالعه از روش PCR Polymerase Chain Reaction برای تشخیص کریپتوکوکوس نئوفورمنس به طور مستقیم از نمونه مایع مغزی نخاعی Cerebrospinal fluid استفاده گردید که بتوان توان تشخیصی را در مواردی که روش های قارچ شناسی ناتوان است افزایش داد.روش بررسی: مطالعه از نوع توصیفی - مقطعی بوده و تعداد 25 نمونه CSF بیماران دارای علایم مغزی مشکوک به مننژیت کریپتوکوکی که در طول سال 1388 به آزمایشگاه قارچ شناسی دانشکده بهداشت دانشگاه علوم پزشکی تهران فرستاده شده بودند تحت آزمایش مستقیم با مرکب چین، کشت و PCR قرار گرفتند. مرحله دوم کار تهیه دو رقت 102 و 106 از کریپتوکوکوس نئوفورمنس در یک میلی لیتر CSF و مقایسه سه روش آزمایش مستقیم، کشت و PCR بوده است.یافته ها: در بررسی میکروسکوپی نمونه ها با مرکب چین تنها یک مورد مثبت شد و هم چنین آزمایش مستقیم هر دو رقت 102 و 106 مثبت گردید. نمونه ای که آزمایش مستقیم آن مثبت شده بود، کشت آن نیز رشد نمود. کشت هر دو رقت 102 و 106 نیز مثبت گردید. در بررسی با PCR تنها همان نمونه ای که آزمایش مستقیم و کشت آن مثبت شده بود از لحاظ مولکولی مثبت شد. PCR هر دو رقت 102 و 106 نیز مثبت گردید.نتیجه گیری: روش راه اندازی شده (PCR) توانست نمونه های کنترل و نمونه مثبت را به خوبی شناسایی نماید.

آلودگیهای مایکوپلاسمایی در واکسنهای ویروسی، نه تنها به خاطر نقش بیماریزایی مایکوپلاسماها دارای اهمیت هستند، بلکه به مراقبت ناکافی تولید کننده در حین تولید واکسن و کنترل کیفی نیز مربوط است. هدف از این بررسی، استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز و کشت به منظور ردیابی مایکوپلاسما در واکسن فلج اطفال بود. طی یک سال (2009-2008 میلادی)، 47 سری از واکسنهای فلج اطفال خوراکی که توسط موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی در ایران تولید شده بودند، از نظر مایکوپلاسما با استفاده از روشهای کشت و واکنش زنجیره ای پلیمراز مورد ارزیابی قرار گرفتند. در روش کشت از محیط های PPLO آگار و PPLO براث استفاده شد و در روش واکنش زنجیره ای پلیمراز از یک جفت پرایمر یونیورسال که از ناحیه 16S rRNA جنس مایکوپلاسما انتخاب شده بود، استفاده گردید. در روش کشت در لوله های حاوی محیط PPLO براث هیچ تغییری از نظر رنگ و pH رخ نداد و در پلیتهای حاوی محیط PPLO آگار نیز هیچ پرگنه ای رشد ننمود. همچنین در روش واکنش زنجیره ای پلیمراز، پس از انجام الکتروفورز هیچ باندی که نشان از وجود DNA مایکوپلاسما باشد، شناسایی نشد. براساس نتایج این مطالعه مشخص گردیدکه روش رایج کشت برای مایکوپلاسما در مورد واکسن های فلج اطفال خوراکی قابل اعتماد است و همچنین واکنش زنجیره ای پلیمراز می تواند مکمل مناسبی برای روش کشت باشد.

باکتری سالمونلا از جمله باکتری های بیماریزا است که می تواند در غذا و مواد اولیه حضور پیدا کند. وجود این باکتری در مواد غذایی علاوه بر ایجاد بیماری می تواند باعث افت کیفیت تولید و کاهش رشد اقتصادی کشور شود. در این مطالعه، تعداد 150 مخزن حمل شیر خام برای شناسایی و جداسازی باکتری سالمونلا در شیر خام، برای مقایسه روش های واکنش زنجیره ای پلیمراز و کشت مورد آزمایش قرار گرفت. در این روش ابتدا شیر خام به روش استاندارد مورد کشت و آزمایش قرار گرفت و سپس مراحل تکمیلی و شناسایی برای جداسازی باکتری سالمونلا انجام شد. با استفاده از روش کشت، 6 نمونه کشت باکتری مشکوک، برای انجام آزمایش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) انتخاب شد که پس از آزمایش PCR و استفاده از شناساگر ژن invA نتایج آزمایش منفی شد. سپس آزمونPCR مستقیم بر روی شیرخام با استفاده از شناساگر ژن invA انجام شد. در این روش تعداد 3 نمونه از 150 نمونه مورد آزمایش مثبت گردید. در مجموع در 2% از کل نمونه ها، آلودگی به باکتری سالمونلا وجود داشت. نتایج این مطالعه نشان داد که روش PCR نسبت به روشهای سنتی در شناسایی باکتری سالمونلا در شیر خام از توانایی بیشتری برخوردار است.

هدف: ارزیابی سرعت و دقت واکنش زنجیره ای پلیمراز نوع Nested-PCR در تشخیص آندوفتالمیت باکتریایی در مقایسه با کشت هوازی میکروب شناختی. روش پژوهش: این مطالعه از نوع آینده نگر تحلیلی و مقایسه ای بر روی 24 چشم از 24 بیمار مبتلا به آندوفتالمیت بستری در بیمارستان فوق تخصصی چشم پزشکی الزهرا انجام شد. زلالیه و زجاجیه بیماران مورد بررسی میکروسکوپی، کشت معمول میکروب شناسی هوازی و Nested-PCR قرار گرفتند و سپس نتایج حاصل با یکدیگر مقایسه شدند. یافته ها: کشت هوازی زجاجیه در 6 مورد (25 درصد) و کشت زلالیه در یک مورد (4 درصد) مثبت شد. براساس Nested-PCR، عامل عفونی در زلالیه 14 چشم (85 درصد) و در زجاجیه 17 چشم (70 درصد) مشخص گردید. همه موارد کشت مثبت، درPCR  نیز مثبت بودند ولی در 61 درصد نمونه های زجاجیه ای کشت منفی، عفونت باکتریایی به وسیله PCR شناسایی شد. نتیجه گیری:Nested-PCR  زلالیه و زجاجیه برای تشخیص آندوفتالمیت باکتریایی، روش موفقیت آمیزی است؛ به ویژه در نمونه های کشت منفی. انجام تحقیقات بیش تر با مدل های دیگرPCR  بر روی سایر انواع آندوفتالمیت توصیه می گردد.

هدف: تایید تشخیص کلستریدیوم سپتیکوم با استفاده از پرایمرهای اختصاصی به روش (PCR) در بین کلستریدیوم های جدا شده از مدفوع گوسفندان منطقه ارومیه.طرح: مطالعه آزمایشگاهی.نمونه ها: 28 سویه کلستریدیوم جدا شده از صد نمونه مدفوع گوسفندی منطقه ارومیه.روش: نمونه برداری از مدفوع تازه گوسفندی، انجام آزمایشات استاندارد میکروب شناسی برای جدا سازی کلستریدیا، استخراج DNA از سویه ها، انجام PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده از قطعه ژنی آلفا - توکسین.نتایج: آزمون بر روی تمامی 28 سویه به اضافه سویه واکسنی کلستریدیوم سپتیکوم به عنوان شاهد مثبت و سه تیپB,C,D  از کلستریدیوم پرفرنژنس به عنوان شاهد منفی انجام گردید. پس از انجام عملیات استخراج DNA با پرایمر اختصاصی قطعه ای از ژن همولیزین کلستریدیوم سپتیکوم (توکسین آلفای باکتری) عملیات PCR صورت پذیرفت. هر شش سویه کلستریدیوم سپتیکوم  به اضافه سویه واکسن در ژل آگارزباند 270 جفت بازی را از خود نشان دادند که به عنوان قطعه مورد نظر در ژن همولیزین کلستریدیوم سپتیکوم تلقی گردید. تمامی گونه های دیگر کلستریدیای استفاده شده، با این پرایمر منفی بودند.نتیجه گیری: با توجه به نتایج به دست امده، می توان پیشنهاد استفاده از روش PCR با پرایمرهای اختصاصی برای تشخیص سریع و اختصاصی کلستریدیوم سپتیکوم را توصیه نمود.

سابقه و هدف: سالمونلا انتریکا سروتایپ تیفی، باکتری مولد بیماری تب تیفوئید می باشد که سالانه بیش از 16 میلیون نفر در جهان به آن مبتلا میشوند و حدود 600 هزار نفر نیز در اثر آن می میرند. روش های کلاسیک تشخیص این بیماری اغلب وقت گیر می باشند و از حساسیت کافی برخوردار نیستند. هدف این مطالعه، ارایه نوعی روش مولکولی واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR: Polymerase Chain Reaction) برای تشخیص سریع و انجام اقدام های درمانی - بهداشتی مناسب و به موقع است.مواد و روش ها: در این مقاله تحقیقاتی ژن اختصاصی viaB مربوط به باکتری سالمونلا تیفی، هدفگذاری و از نرم افزار Generunner، برای طراحی پرایمرهای اختصاصی استفاده شد. واکنش PCR ژن فوق با استفاده از ژنوم باکتری استاندارد (PTCC 1609) انجام و ویژگی روش نیز با استفاده از ژنوم انواعی از نمونه های کنترل منفی تعیین گردید. به منظور ساخت کنترل مثبت، تعیین حساسیت و حد تشخیص، کلونینگ محصولات PCR در وکتور پلاسمیدی pTZ57R/T انجام گرفت.یافته ها: الکتروفورز محصولات PCR، باندی به طول 441 جفت باز را برای ژن viaB نشان داد. نمونه های کنترل منفی مورد استفاده هیچ باندی ایجاد نکردند. کلونینگ محصولات PCR در وکتور pTZ57R/T با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و تعیین ترادف تایید گردید.بحث و نتیجه گیری: پرایمرهای طراحی شده برای ژن viaB در این روش میتواند با حساسیتی حدود 19 کپی از ژنوم برای شناسایی این ارگانیسم به کار رود و با ردیابی سریع و دقیق باکتری، از ایجاد عوارض پایدار و ناخواسته جلوگیری نماید.

زمینه و اهداف: Bartonella quintana باکتری گرم منفی است که ایجاد کننده بیماری Trench fever است. باکتری می تواند از عوامل ایجاد کننده اندوکاردیت باشد. اندوکاردیت باکتریایی بیماری خطرناک و گاه کشنده ای است. تشخیص به موقع و سریع باکتری با روش های مولکولی مانند PCR حائز اهمیت می باشد. در این مطالعه، آلودگی موارد مبتلا به باکتری B. quintana با روش PCR مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش کار: نمونه های اندوکاردیت کشت منفی از بیماران جمع آوری شد. PCR، انجام گرفت و ژنftsz تکثیر و جداسازی شد. نمونه هایی اندوکاردیت تعیین توالی شدند. نمونه کنترل مثبت سنتز شد و درون وکتور PUC 18 آماده گردید. تعیین ویژگی برای باکتری ها انجام گرفت و ژن کلون گردید. جهت تایید کلونینگ، کلنی PCR انجام گرفت. پلاسمیدها، استخراج شدند و در نهایت حساسیت و حد تشخیص تعیین گردید. یافته ها: تعیین توالی نشان داد که نمونه ها مربوط به باکتری های کلبیسلا پنومونیه بودند. به منظور بررسی ویژگی، هیچ باندی روی ژل آگارز مشاهده نگردید. این موضوع نشان داد که پرایمرهای طراحی شده فقط به باکتری مورد نظر متصل می شود. آخرین رقت پلاسمید با غلظت ng/µ, l780 که باند قابل تشخیصی را در روی ژل ایجاد نمود، 7-10 و کمترین تعداد کپی قابل تشخیص در PCR برابر 24 کپی محاسبه گردید. نتیجه گیری: در سال های اخیر تلاش زیادی برای توسعه روش های مولکولی سریع و خاص برای تشخیص بارتونلا انجام شده است. به نظر می رسد روش PCR ابزار مفیدی است که ممکن است زمان تشخیص B. quintana را در طول عفونت های سیستمیک، مانند اندوکاریت کاهش دهد. متن کامل این مقاله به زبان انگلیسی می باشد. لطفا برای مشاهده متن کامل مقاله به بخش انگلیسی مراجعه فرمایید.لطفا برای مشاهده متن کامل این مقاله اینجا را کلیک کنید.

مایکوپلاسما سینوویه یکی از با اهمیت ترین عوامل بیماری زای پرندگان در سرتاسر جهان می باشد که موجب خسارات اقتصادی جدی در صنعت پرورش طیور از طریق ایجاد عفونتهای مجاری تنفسی و سینوویت عفونی و ایجاد زمینه برای بروز عفونت توسط دیگر میکروارگانیسم ها می گردد. این مطالعه جهت جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما سینوویه با بکارگیری روشهای کشت و واکنش زنجیره ای پلیمراز از مزارع پرورش مرغ گوشتی استانهای تهران، قزوین و مرکزی که در پرورش طیور گوشتی از اهمیت ویژه ای برخوردارند، انجام گرفت. 43 نمونه سوآپ کامی- حلقی، نای و کیسه های هوایی، به صورت همزمان مورد کشت (در محیط های اختصاصی PPLO) و آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز قرار گرفتند. استخراج DNA باکتریها به روش فنل-کلروفرم انجام گرفت و آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز بر روی نمونه های استخراجی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی در ناحیه ژن 16S rRNA با محصولاتی به طول 163 bp برای جنس مایکوپلاسما و 207 bp برای گونه مایکوپلاسما سینوویه انجام شد. از 43 نمونه سوآپ، 28 نمونه دارای پرگنه در محیط کشت و 33 نمونه نیز در آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز مثبت گزارش شدند، در حالیکه 6 نمونه دارای نتیجه کشت منفی، واکنش زنجیره ای پلیمراز مثبت و تنها یک نمونه کشت مثبت، واکنش زنجیره ای پلیمراز منفی گزارش شد. 24 نمونه از سوآپ ها نیز در آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز گونه مایکوپلاسما سینوویه مثبت تشخیص داده شدند که همگی آنها در آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز جنس مایکوپلاسما مثبت گزارش شده بودند. در این مطالعه آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز آلودگی به مایکوپلاسما را به میزان بیشتری نسبت به کشت ردیابی کرد و از طرف دیگر آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز نسبت به کشت، بسیار سریعتر و ارزانتر بود، لذا می توان نتیجه گیری کرد که آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز می تواند به عنوان روش جایگزین برای کشت، با توانایی بسیار بالا در ارائه آمار واقعی آلودگی مزارع مرغ گوشتی به مایکوپلاسما سینوویه توصیه گردد.

اورنیتوباکتریوم رینوتراکئال (ORT) به صورت یک عامل بیماریزای باکتریایی نوظهور در گله های ماکیان و بوقلمون شناخته شده است. تشخیص عفونت ORT با برخی مشکلات در کشت و شناسایی قطعی باکتری با کمک خواص بیوشیمیایی آن مواجه بوده است. دسترسی به یک روش شناسایی قطعی و قابل اتکا که بتواند در پژوهشهای آزمایشگاهی متداول بکار آید، حایز اهمیت می باشد. هدف از این مطالعه شناسایی ORT به روش زنجیره ای پلیمراز (PCR)، درمقایسه با روش کشت بود. به منظور راه اندازی این PCR از پرایمرهای OR16S-F1 و OR16S-R1، باکتریهای شناخته شده ORT و 7 گونه باکتری دیگر، نظیر هموفیلوس پاراگالیناروم و پاستورلا مولتوسیدا، به ترتیب به عنوان کنترلهای مثبت و منفی استفاده شد. روش استخراج فنل و کلروفرم برای تهیه DNA از نمونه ها به کار رفت. 60 نمونه تجمیع شده بدست آمده از نای و سینوس زیر چشمی 30 گله جوجه گوشتی کشتار شده در یکی از کشتارگاههای منطقه قزوین، از نظر آلودگی به ORT با هر دو روش کشت و PCR بررسی شدند. یک باند 784 جفت بازی در 5 نمونه کنترل مثبت ORT، 19 مورد از 60 نمونه اولیه، شامل 11 نمونه هموژنیزه نای و 8 نمونه سواب سینوس زیر چشمی و در تمامی17 نمونه باکتریهای جدا شده و مشکوک به ORT دیده شد؛ ولی در 7 مورد باکتری کنترل منفی مشاهده نگردید. در یک مورد از 41 نمونه اولیه منفی شده در PCR، باکتری ORT با کمک کشت جداسازی گردید و این باکتری تکثیر شده در آزمایش مجدد PCR مورد شناسایی قرار گرفت. پانزده مورد از 30 گله (50 درصد) در آزمایش PCR مثبت تشخیص داده شدند و تنها یک مورد از آنها در کشت باکتریایی منفی شد. بر اساس نتایج بدست آمده؛ PCR بکار رفته در این مطالعه می تواند برای شناسایی مطمئن و سریع ORT در نمونه های مشکوک به عفونت ORT استفاده شود، اما بهتر است که به منظور به حداکثر رساندن تشخیص عفونت، با روش کشت توام باشد.